制药企业洁净室怎样进行环境微生物的监控

2020-05-09 16:33:43


制药企业洁净室常需进行环境微生物的监控,以确保出产环境的洁净以及不会形成药品的污染。制药企业洁净室常见的污染源如下(据我国食品药品检定研究院在2018年全国药品微生物查验控制技能精要操练班上的讲座ppt):


1、人体携带的微生物主要有:金葡、表葡、八叠球菌、不动杆菌、产碱杆菌、亲脂性酵母、皮肤真菌等。


2、空气带有的微生物主要有:微球菌属、芽孢杆菌属、葡萄球菌属、棒状杆菌、曲霉、青霉。


3、设备、墙面、地上表面。存留的微生物首要有:假单胞菌、表葡、芽孢杆菌等。


4、原材料及包装材料。带着的微生物有:乳杆菌、假单胞菌、芽孢杆菌、链球菌、梭菌、霉菌(枝孢属、青霉属、曲霉属)。


5、水中的微生物主要有:假单胞菌、产碱杆菌、寡养单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、皮氏伯克霍尔德菌、甲基杆菌属、沙雷氏菌、黄杆菌等。


许多企业为了断定菌种,常将许多资金用于微生物全自动断定仪器和相关试剂的购买。其实,一些微生物生化断定试剂盒(无须软件和仪器)、差异培养基和PCR试剂盒即可结束常见菌种的断定工作。


关于以上赤色标出的菌种或菌属,已知均可用HiMedia出产的生化断定试剂盒去作断定。其生化断定试剂盒包含有生化断定卡及辅佐试剂,每个生化断定卡上有12个孔,预置相关的培养基和生化试剂,对应12种生化反应。反应结束后,通过试剂盒内供应的效果诠释表和菌种标准表,即可人工结束菌种断定。其试剂盒掩盖大部分常见菌种,准确度高,在欧盟和美国FDA均有产品注册。


 上面的常见菌群中,金葡、表葡可用葡萄球菌的生化断定试剂盒(货号KB004)进行断定,不动杆菌、芽孢杆菌、乳杆菌、链球菌均有相应的生化断定试剂盒。假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌可用非发酵菌生化断定试剂盒(货号KB019)进行断定。沙雷氏菌归于肠杆菌科,可用肠杆菌科的生化断定试剂盒(货号KB003)进行断定。


 关于黄色部分的菌种:寡养单胞菌,又称嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),旧名“嗜麦芽假单胞菌”。它和皮氏伯克霍尔德菌、黄杆菌均可用非发酵菌试剂盒进行断定。


关于蓝色部分的菌种:


1、微球菌属。最常见为藤黄微球菌(Micrococcus luteus)。其为革兰氏阳性,与葡萄球菌近似,菌落光滑,颜色呈黄或赤色。为条件致病菌,广泛存在于自然界。《伯杰氏细菌断定手册》指出,其接触酶阳性,无运动性,可利用乙酸盐、乳酸盐和丙酸盐,不发生吲哚。根据生化特征差异藤黄微球菌时,首要根据其在含糖的杂乱培养基上好氧的生长而不发生可察觉的酸。其菌落呈黄色、黄绿色或橙色。详细断定,可选用如下方案:1)先革兰氏染色,观察镜下形状,如为球形,革兰阳性,且疑为葡萄球菌或微球菌。2)可选用“葡萄球菌和微球菌发酵培养基”(英文名Fermentation HiVeg Medium for Staphylococcus and Micrococcus,货号#MV827),以差异微球菌和葡萄球菌。其原理是,培养基中包含葡萄糖,葡萄球菌能厌氧产酸,而微球菌不能。培养基含有的溴甲酚紫为pH指示剂,可指示产酸带来的pH改动。该液体培养基含有少数琼脂,因而创造出厌氧环境。培养18-24小时后,如果是藤黄微球菌,则反应管没有颜色改动,而葡萄球菌的管变为金黄色。


2、八叠球菌属:归于消化球菌科,细胞球形,呈八个或更多细胞的立方堆状。可构成芽孢,革兰阳性。可发酵葡萄糖,产酸,专性厌氧,在pH1到9.8均可生长。无接触酶。镜下应不难辨认。


关于产碱杆菌,它与产碱假单胞菌非常近似,它的差异特征是在含有蛋白胨的肉汤培养基中产氨,使pH上升。粪产碱杆菌最常见,它在碳水化合物培养基上呈剧烈的产碱反应。木糖氧化产碱杆菌使OF葡萄糖培养基和OF木糖培养基产酸。本菌能恢复亚硝酸盐,而不能恢复硝酸盐。因而,选用OF根底培养基(英文名:OF Basal HiVegTM Medium,货号MV395)和相应的糖溶液可差异产碱杆菌。


关于棒状杆菌,它归于革兰氏阳性大杆菌,接触酶阳性。可选用碲酸盐血琼脂平板进行别离培养,棒状杆菌菌落呈灰黑色。


关于甲基杆菌,可选用PCR 法扩增菌株的16S rDNA 和甲醇脱氢酶大亚基的 mxaF 基因,扩增产品进行测序,在NCBI数据库顶用BLAST 进行比对,并用MEGA4.0软件进行系统进化树分析。甲基杆菌为革兰阴性,氧化酶和接触酶阳性。


 关于梭菌,大部分为严峻厌氧菌。在《伯杰细菌断定手册》中给出了一个表,首要根据糖发酵来断定梭菌属内的各个菌种。HiMedia公司供应了一种包含35种糖发酵的试剂盒(货号KB009),因而可用于梭菌的断定。


关于真菌,如亲脂性酵母和霉菌(枝孢属、青霉属、曲霉属),首先从形状上可差异细菌,也可差异酵母和霉菌,霉菌常常有丝状菌丝。不同霉菌,有些从形状上也可差异。青霉菌属帚状枝是根据青霉菌属特征性效果,根据菌落特征、分生孢子梗、帚状枝、瓶梗和分生孢子形状特征,就可断定到属甚至种水平。曲霉具有有隔菌丝、分生孢子梗和特别的分生孢子头结构,易与其他菌属真菌差异。还可根据SDA或PDA平板上生长的快慢、菌落形状、分生孢子梗等进一步差异。HiMedia也供应了一款差异培养基,货号M1127,可差异巴西曲霉、黄曲霉和寄生曲霉。


总之,关于制药企业洁净室的常见菌,通过形状染色、生化断定(可选用市面上供应的生化断定试剂盒)、PCR产品测序等办法,已足以满意断定的需求,然后结束溯源和确诊的使命。


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